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srm技术服务

mrm技术流程
mrm概述
       质谱多反应监测技术/选择反应监测(mrm/srm)是对复杂混合物中目标蛋白质进行定量(absolute quantitation/ relative quantitation的重要技术手段。mrm/srm作为一种蛋白质组学的质谱分析方法,具有特异性强、灵敏度高、准确度高、重现性好、线性动态范围宽、自动化高通量的突出优点,是目前最灵敏的质谱检测模式,被誉为质谱的“金标准”。
       通过
mrm/srm技术进行实时的定量监测可以进行药代动力学研究、临床诊断、违禁药物检查、食品化妆品等工业质量控制、环境检测、农业植物学研究以及代谢组学和基于蛋白质组学的生物标志物发现、蛋白质翻译后修饰等相关研究。
mrm技术原理
      mrm/srm技术是一种基于已知或假定的反应离子信息,有针对性地选择数据进行质谱信号采集,对符合规则的离子进行信号记录,去除不符合规则离子信号的干扰,通过对数据的统计分析从而获取质谱定量信息的质谱技术。
     该方法首先检测到具有特异性的母离子,然后只将选定的特异子离子进行质谱信号的采集。最终,通过合成同位素形成的目标肽段,将已知浓度的内标肽与待测样品混合,选择特定母子离子对获得不同的色谱检出信号,比较两者的信号强度值,实现目的蛋白质的绝对定量

实验流程
目标蛋白定量
                                          目标蛋白定量示意图
mrm优势
        mrm
        质谱定量方法金标准,被称为“基于质谱的ELISA”;  
      当今基于质谱重现性最好的技术
      通量高,一次实验可以平行定量几十到几百个蛋白;
      重复性高,可以实现四个数量级的定量,变异小;
      不需要抗体,因此适用于验证及定量因缺少抗体而无法采用werstern或者ELISA进行定量的蛋白,如同源较高的蛋白家族,带有翻译后修饰蛋白(如磷酸化,甲基化蛋白等等),植物、微生物、模式生物的蛋白
客户mrm案例(部分)
mrm技术
                                    mrm实验结果图(部分)
mrm适用范围
         itraq实验中差异蛋白后续验证;
        label free 差异蛋白后验证;

       蛋白绝对定量;
       肽段绝对定量;
       疾病标志物定量,建立诊断模型;
       磷酸化蛋白定量,甲基化蛋白定量;
       其他翻译后修饰蛋白定量;
       通路整体蛋白定量分析。
客户提供
       蛋白提取物:浓度>1μg/μl,蛋白质总量 >600μg;

       细胞样品:细胞量>107  

       组织样品:动物、微生物组织湿重>10mg
                                           植物组织 > 200mg


       体液样品:血液体积>1ml
参考论文
   [1]  Chen Chen, Xiaohui Liu, Weimin Zheng, Lei Zhang, Jun Yao, and Pengyuan Yang,Screening of Missing Proteins in the Human Liver Proteome byImproved    MRM-Approach-Based  Targeted Proteomics ,Journal of Proteome Research  2014, 13, 1969-1978
   [2]  Han Sun, Chen Chen, Baofeng Lian, Menghuan Zhang, Xiaojing,Wang, Bing Zhang, Yi-Xue Li, Pengyuan Yang, and Lu Xie  Identification of HPV integration and gene mutation in HeLa  cell line by integrated analysis of RNA-Seq and MS/MS data   J. Proteome Res., Just Accepted                    Manuscript • Publication Date (Web): 20 Feb 2015
   [3]  Picotti P, Aebersold R. Selected reaction monitoring-based proteomics: workflows, potential, pitfalls and future directions. Nature Methods. 2012; 9(6): 555-66.
   [4]  Addona TA, Shi X, et al。 A pipeline that integrates the discovery and verification of plasma protein biomarkers reveals candidate markers for cardiovascular disease。 Nature Biotechnol。 2011; 29(7): 635-43。

已发mrm论文
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