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蛋白质谱

技术概述
       多肽组学英文全称 peptidomics,是研究生物体内源性的多肽和小分子蛋白,尤其是指在血液,脑脊液,乳汁等体液中的研究。这些内源性多肽中有许多信号调节分子,如细胞因子,生长激素,激素肽等等,可以提供许多很有价值的信息,还有不少小分子蛋白和肽段有的功能未知,有的属于循环体液中某些蛋白的疾病特异的降解片段,这些可溶的片段可以提供关于疾病状态、药效于毒性等相关的丰富信息。
技术优势
不需要抗体:抗体对小于10kd的肽段很难作用;
准确鉴定肽段序列:基于质谱可以准确重复地鉴定肽段;
高效的富集效率:99%以上的蛋白质量在样品处理中被去除;
快速建立方法
应用领域
标志物发现/验证:鉴定和验证潜在的疾病标志物/药物靶标;

副作用的影响:检测非特异和非需要的药物影响,如降解;

样品质控:肽段作为降解产物可以指示样品的质量。
应用案例
研究目的:鉴定人乳汁中的多肽,研究其功能
样本:5个妈妈哺乳期第28天乳汁
实验步骤:
第一步,乳汁样品:去除脂类和蛋白,纯化出样品的多肽;
第二步,LC-MS/MS  质谱分析:Exclustion list 增加鉴定数;
第三步,数据分析:多肽鉴定及内源性断裂位置分析;
第四步,功能性实验:乳汁纯化多肽的抗菌性实验
实验结果:
    鉴定到乳汁样品中属于37个蛋白的300多个肽段,其中最多的肽段属于β-酪蛋白,但是其他乳汁高风度蛋白如乳铁蛋白,乳白蛋白,免疫球蛋白A没有肽段被鉴定到。对比鉴定到的多肽到其对应蛋白序列,发现内源性多肽只来源于一些特定的蛋白,以及蛋白特异性的序列。许多鉴定到的乳汁肽段与已知的抗菌肽或免疫调节多肽序列相似,文章中乳汁纯化的肽段也被实验证明可以抑制大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的生长。
    同一研究小组在另一篇关于乳汁中内源性多肽的研究中,报告了乳腺中内源性蛋白酶活性是高度特异和保守的。蛋白内源性降解主要发生在蛋白无序结构区域。




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